DNA complementare: differenze tra le versioni
Contenuto cancellato Contenuto aggiunto
Nessun oggetto della modifica |
Nessun oggetto della modifica |
||
Riga 10:
== Sintesi ==
Per produrre il cDNA si sintetizzano le due eliche separatamente: la prima utilizzando l'[[mRNA]] come stampo, la seconda invece viene sintetizzata a partire dalla prima.
Il cDNA è sintetizzato dunque a partire da mRNA maturo (già sottoposto a splicing), utilizzando l'enzima [[trascrittasi inversa]]. Questo enzima opera su un singolo filamento di mRNA, generando il suo DNA complementare basandosi sull'appaiamento delle [[Base azotata|basi azotate]] dell'RNA (A, U, G, C) con quelle del DNA (A, T, G, C).▼
=== ''Elica stampo ([[complementare]] all'mRNA)'' ===
▲
* Procedimento:
# una cellula eucariota trascrive il DNA in RNA ([[pre-mRNA]]);
# la stessa cellula [[RNA messaggero#Modificazioni del pre-mRNA eucariotico|processa]] i filamenti di pre-mRNA eliminando gli introni, aggiungendo un'
# i filamenti di mRNA maturo vengono estratti dalla cellula;
# l'mRNA viene messo in soluzione a contatto con un [[oligonucleotide]] [[primer]] di poli-[[timina|T]], che ibridizza con la coda poli-A dell'mRNA.
# la trascrittasi inversa riconosce il primer ed avvia la produzione del cDNA, in presenza dei [[deossinucleotide|deossinucleotidi]] necessari per l'elongazione (senza la presenza del primer, l'enzima non funziona).
===''Elica codificante'' ===
La sintesi dell'elica [[codificante]] avviene allo stesso modo della [[replicazione]] dell'elica detta [[in ritardo]] o [[lagging strand]]. Per questo si utilizzano tre enzimi: [[DNA polimerasi]] di E.coli l'[[RNasi H]]. e la [[DNA ligasi]]
* Procedimento:
# la RNasi H, che riconosce i dimeri RNA-DNA degrada l'mRNA lasciando solo alcuni frammenti.
# questi frammenti fanno da primers per la DNA polimerasi che copia l'elica complementare
# l'attività esonucleasica dell'enzima fa sì che i primer di RNA vengano degradati e sostituiti con DNA.
# la DNa ligasi unisce tutti i frammenti, generando l'elica completa.
Il cDNA così è pronto.
== Applicazioni ==
Il DNA complementare viene spesso utilizzato nel [[clonaggio genico]]
== Voci correlate ==
Line 28 ⟶ 44:
* [[Splicing]]
* [[Sintesi proteica]]
* [[EST]]
== Collegamenti esterni ==
* {{en}} [http://www.maxanim.com/genetics/cDNA/cDNA.htm Animazioni sul DNA complementare]
| |||