Differenze tra le versioni di "Nick translation"

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Data la [[radioattività]] della tecnica, si è preferito utilizzare in sostituzione dei deossiribonucleotidi legati a molecole che agiscono come [[fluorofori]], al posto degli isotopi radioattivi del fosforo, capaci dunque di mostrare fluorescenza se sottoposti ad adeguata illuminazione in analisi.
 
Il metodo si avvale di una sequenza di DNA doppio filamento, che una volta purificata viene ad essere tagliata con una endonucleasi ''a-specifica'' come la [[DNasi|DNAsiIDNAsi]] capace di causare delle rotture a singolo filamento, in gergo chiamate proprio '''nick''', generate dalla rottura dei legami [[Fosfodiesterasi|fosfodiesterici]]. La presenza di un nick è il substrato di reazione per la [[DNA polimerasi (DNA-dipendente)|DNApolI]], che partendo dal punto di rottura inizia ad integrare via via i dNTP marcati sostituendo i nucleotidi presenti, non marcati: la capacità di rimozione, detta in gergo attività [[Esonucleasi|5'-esonucleasica]] è un caratteristica intrinseca e distintiva di questa DNA polimerasi DNA-dipendente.
 
La reazione può essere controllata inibendo chimicamente l'enzima, attraverso l'introduzione di [[tris-EDTA]] in soluzione: questo causa la denaturazione della miscela enzimatica portando al termine della reazione.
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