Elettroforesi su gel di agarosio: differenze tra le versioni

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{{stub|chimicabiochimica|biologia molecolare}}
 
[[Immagine:Agarose_gel_electrophoresis.jpg|thumb|Vaschetta per elettroforesi su gel]]
[[Immagine:Load DNA Gel.jpg|thumb|Caricamento dei "pozzetti" del gel con il campione da analizzare]]
[[Immagine:Load a sample into a agarose gel.jpg|thumb|Particolare del caricamento dei "pozzetti"]]
[[Immagine:Cutting of the agarose gel.jpg|thumb|Taglio del gel, sotto luce UV, per l'eventuale recupero delle sostanze separate]]
L'[[elettroforesi]] su [[gel]] di [[agarosio]] è una tecnica che serve per analizzare e purificare il [[DNA]] tagliato precedentemente dagli [[Deossiribonucleasi II (sito-specifica)|enzimi di restrizione]]. Questa tecnica utilizza le cariche presenti nelle molecole di DNA (caricata negativamente) per farle correre attraverso un gel di selezione, costituito da una rete di pori, che ha la funzione di separare le molecole in base alla loro grandezza, quelle più piccole attraversano più velocemente i pori rispetto a quelle più grandi quindi si avrà una separazione in funzione della velocità.
 
==Struttura dell’agarosio==
L’agarosio è un [[polisaccaride]] lineare e neutro formato da unità di D-[[galattosio]] e di 3,6-anidro-L-galattosio legate alternativamente con legami glicosidici. L’agarosio è uno zucchero solubile in acqua alla [[temperatura di ebollizione]], mentre diventa solido man mano che si raffredda formando una matrice attraverso dei legami a idrogeno tra le catene lineari.
L’agarosio non è l’unico utilizzato per questa tecnica infatti ne esistono di diversi tipi: [[amido]], miscela agarosio-[[poliacrilammide]] (consente una più fine separazione delle molecole).
 
==Caricamento dei campioni==
I campioni da analizzare vanno depositati, con una [[micropipetta]], in apposite fenditure verticali, dette "pozzetti", praticate nel gel a poca distanza dal margine dalla parte del polo negativo. Essendo il DNA un polianione i frammenti migreranno in avanti verso il polo positivo.
 
==Taratura del gel==
L’elettroforesi su gel è una tecnica ideale per determinare le dimensioni dei frammenti di DNA digeriti con enzimi di restrizione. Per questo scopo è necessario costruire una curva di [[taratura]] in grado di fornire un valore approssimativo sulle reali dimensioni delle molecole di DNA. Per la taratura bisogna far migrare nel gel un marcatore contenete frammenti di DNA di dimensioni già note. Da questo si vede che esiste una relazione di linearità fra il [[logaritmo]] delle dimensioni del frammento e la distanza percorsa dal gel. Dalla curva di taratura è perciò possibile stabilire le dimensioni dei frammenti di DNA.
 
==Colorazione del DNA==
[[Immagine:Gel electrophoresis 2.jpg|thumb|200px|Frammenti Di DNA separati tramite elettroforesi su gel, colorati con [[etidio bromuro]] ed esposti a luce ultravioletta]]
L’elettroforesi su gel è anche uno strumento molto utile per purificare uno specifico frammento di DNA, in questo caso per facilitare il recupero si usa un colorante che permette una visualizzazione maggiore. Esistono diversi tipi di coloranti anche se quello più utilizzato è l’[[etidio bromuro]], questa è una molecola planare che si inserisce tra le basi impilate del DNA a doppio filamento, queste molecole emettono luce [[fluorescenza|fluorescente]] quando sono irradiati con [[ultravioletto|luce ultravioletta]] (300 nm).
L’etidio bromuro può essere aggiunto direttamente sul gel (la velocità di migrazione si riduce del 10-15 %), o alternativamente dopo l’elettroforesi.
Esistono altri tipi di coloranti: colorazione con [[argento]], [[blu cresile brillante]], [[blu di metilene]].
 
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|[[Immagine:Agarosegel.jpg|thumb|Gel all'1% di agarosio prima di essere esposto a luce UV]]
|[[Immagine:AgarosegelUV.jpg|thumb|Gel esposto a luce ultravioletta, il [[bromuro di etidio]] legato al DNA emana luce fluorescente arancione]]
|[[Immagine:Gel electrophoresis 2.jpg|thumb|200px|Frammenti Di DNA separati tramite elettroforesi su gel, colorati con [[etidio bromuro]] ed esposti a luce ultravioletta]]
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{{Portale|Biologia|Chimica}}
 
[[Categoria:Tecniche di laboratorio]]
 
[[de:Agarose-Gelelektrophorese]]
[[en:Agarose gel electrophoresis]]
[[fr:Électrophorèse en gel d'agarose]]
[[ja:アガロースゲル電気泳動]]