Colorazione di Gram: differenze tra le versioni
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{{W|biologia|agosto 2018}}
La '''colorazione di Gram''' è un esame di laboratorio che dà ragione della classificazione dei [[bacteria|batteri]] in [[Batteri Gram-positivi|Gram-positivi]] e [[Batteri Gram-negativi|Gram-negativi]] (anche indicati come ''Gram+'' e ''Gram−'').
Fu messa a punto nel [[1884]] dal medico danese [[Hans Joachim Christian Gram]], e mette in evidenza alcune proprietà fondamentali della [[parete batterica|parete cellulare]] dei microrganismi.
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==Batteri Gram negativi==
{{vedi anche|Batteri Gram-negativi}}
La parete delle cellule dei batteri Gram negativi è molto complessa, la membrana esterna si trova al di fuori dello strato di [[peptidoglicano]], e la proteina presente in maggior quantità è la lipoproteina di Brown, che presenta una terminazione idrofobica tramite la quale si lega alla membrana esterna. In questo modo la lipoproteina funge da legante fra la membrana esterna e lo strato di peptidoglicano.
La membrana esterna presenta molte molecole grosse e complesse, denominate “lipopolisaccaridi (LPS)” suddivisi in tre complessi distinti:
* ''La regione del lipide A'': costituita da un disaccaride con attaccati a ciascun carboidrato tre acidi grassi e fosfato, una cui parte si proietta dalla superficie verso l'esterno, mentre il resto del complesso è ancorato alla membrana esterna.
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==Procedura==
1. Mettere una goccia di acqua sul [[vetrino portaoggetti]].[[Immagine:Bacillus cereus Gram.jpg|thumb|Colonia di ''[[Bacillus cereus]]'' (Gram +)]]2. Sterilizzare l'[[Ansa (vetreria)|ansa]] e con essa prelevare il microrganismo da una piastra .
3. Stendere il microrganismo prelevato dalla colonia sulla goccia.
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4. Aspettare che si asciughi.
5. Fissare sul vetrino passandolo sul [[Becco di Bunsen|bunsen]] in modo che aderisca per bene.
6. Predisporre una vaschetta per colorazione e appoggiare i vetrini su un supporto orizzontale oppure mantenere orizzontale il vetrino portaoggetti con l'aiuto di una pinza porta vetrini.
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7. Ricoprire il preparato con [[Violetto di genziana]] o cristal-violetto che colora le componenti acide della parete batterica e lasciar agire per due minuti.
8. Eliminare l'eccesso di colorante e sciacquare con acqua; [[Immagine:Escherichia coli Gram.jpg|thumb|Colonia di ''[[Escherichia coli]]'' (Gram −)]]9. Ricoprire con il [[liquido di Lugol]] che funge da [
10. Contrastare con [[safranina]] per un minuto. Questo colora le componenti acide rimaste libere dei Gram- e li colora in rosso, mentre non può legarsi ai componenti molecolari dei Gram+, impegnati nel legame con il cristal-violetto. Sciacquare con acqua, sgocciolare il vetrino e lasciarlo asciugare all'aria o passandolo sul bunsen.
11. Osservare al [[microscopio ottico]] dapprima a basso ingrandimento e poi con [[obiettivo a immersione]]. Come risultato finale si avrà i batteri Gram+ di colore [[Viola (colore)|viola]], mentre i batteri Gram- di colore [[rosso]].
Le colture batteriche molto vecchie tendono a trattenere meno il colorante, apparendo meno Gram-positive di quanto siano in realtà; alcune (poche) specie di batteri inoltre non danno un responso chiaro alla colorazione, e sono dette ''[[Gram-variabili]]''.
La colorazione di Gram è una colorazione di tipo regressivo in quanto, dopo una prima colorazione generale con [[violetto di nicole]] o di genziana, avverrà una decolorazione dei batteri Gram− con dell'alcool etilico puro, per poi essere ricolorati utilizzando della safranina.
== Significato biologico della colorazione ==
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