Colorazione di Gram: differenze tra le versioni
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Con tale metodo è possibile esaminare sia batteri in coltura sia frammenti di tessuti.
==Significato biologico della colorazione==▼
La differenza nella capacità di trattenere il colorante basico è data dalla quantità di peptidoglicano ([[mureina]]) contenuto nella parete cellulare: i Gram-positivi presentano amminozuccheri [[N-acetilglucosamina]] e [[acido N-acetilmuramico]], ai quali sono legate corte catene di amminoacidi, che conferiscono stabilità e consistenza a tale strato; i Gram-negativi presentano invece una parete più sottile, ricca di lipopolisaccaridi e lipoproteine.▼
==Colorazione di Gram di alcuni microrganismi comuni==
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==Procedura==
1. Mettere una goccia di acqua sul vetrino portaoggetti.[[Immagine:Bacillus cereus Gram.jpg|thumb|Colonia di ''[[Bacillus cereus]]'' (Gram +)]]2. Sterilizzare l'ansa e con essa prelevare il microrganismo da una piastra .
3. Stendere il microrganismo prelevato dalla colonia sulla goccia.
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7. Ricoprire il preparato con cristal-violetto che colora le componenti acide della parete batterica e lasciar agire per due minuti.
8. Eliminare l'eccesso di colorante e sciacquare con acqua; [[Immagine:Escherichia coli Gram.jpg|thumb|Colonia di ''[[Escherichia coli]]'' (Gram −)]]9. Ricoprire con il [[liquido di Lugol]] che funge da [https://it.wikiversity.org/wiki/Mordenzante mordenzante]. Lasciar agire per un minuto. Far scivolare l'eccesso di Lugol e decolorare il vetrino con etanolo. A questo punto la parte esterna dei Gram -, costituita da un doppio strato lipidico e lipopolisaccaridi e legata al colorante, verrà solvatata dall'etanolo, lasciando lo strato di peptidoglicano sottostante. La parete dei Gram+ invece, formata da uno spesso strato di peptidoglicano, non verrà solvatata e rimarra legata al cristal violetto.▼
▲9. Ricoprire con il [[liquido di Lugol]] che funge da [https://it.wikiversity.org/wiki/Mordenzante mordenzante]. Lasciar agire per un minuto. Far scivolare l'eccesso di Lugol e decolorare il vetrino con etanolo. A questo punto la parte esterna dei Gram -, costituita da un doppio strato lipidico e lipopolisaccaridi e legata al colorante, verrà solvatata dall'etanolo, lasciando lo strato di peptidoglicano sottostante. La parete dei Gram+ invece, formata da uno spesso strato di peptidoglicano, non verrà solvatata e rimarra legata al cristal violetto.
10. Contrastare con safranina per un minuto. Questo colora le componenti acide rimaste libere dei Gram- e li colora in rosso, mentre non può legarsi ai componenti molecolari dei Gram+, impegnati nel legame con il cristal-violetto. Sciacquare con acqua, sgocciolare il vetrino e lasciarlo asciugare all'aria o passandolo sul bunsen.
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La colorazione di Gram è una colorazione di tipo regressivo in quanto, dopo una prima colorazione generale con violetto di nicole o di genziana, avverrà una decolorazione dei batteri Gram− con dell'alcool etilico puro, per poi essere ricolorati utilizzando della safranina.
▲== Significato biologico della colorazione ==
▲La differenza nella capacità di trattenere il colorante basico è data dalla quantità di peptidoglicano ([[mureina]]) contenuto nella parete cellulare: i Gram-positivi presentano amminozuccheri [[N-acetilglucosamina]] e [[acido N-acetilmuramico]], ai quali sono legate corte catene di amminoacidi, che conferiscono stabilità e consistenza a tale strato; i Gram-negativi presentano invece una parete più sottile, ricca di lipopolisaccaridi e lipoproteine.
== Voci correlate ==
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