La stagione vide il ritorno alle competizioni dei Cleveland Browns per la prima volta dal 1995. Questo fatto portò il numero di squadre della lega a 31 (era dal 1966 che la NFL non contava un numero dispari di squadre) e indusse gli organizzatori a stabilire un calendario di 17 giornate in cui una squadra avrebbe dovuto osservare un turno di riposo. Prima di questa stagione non era mai accaduto che nessuna squadra avesse osservato un turno di riposo nelle prime due giornate o nelle ultime sette, ma con il nuovo calendario, le prime due e le ultime otto giornate videro una squadra riposare, mentre le sette giornate dalla terza alla nona videro riposare tre squadre. Questo calendario rimase in vigore fino alla riorganizzazione del 2002 in cui il numero di squadre passò a 32 con l'introduzione degli Houston Texans.
Sempre in questa stagione i Tennessee Oilers cambiarono la loro denominazione in Tennessee Titans ed il nome Oilers venne ritirato dalla NFL. Fu la prima volta che la lega decise di ritirare il nome di una franchigia.
La stagione vide inoltre il ritorno dell'uso dell'instant replay come parte integrante dell'arbitraggio.
A causa delle preoccupazione per il millennium bug, la NFL decise di non disputare l'inizio dei play-off il 1º gennaio del 2000, ma spostò l'ultima giornata della stagione regolare il 2 gennaio ed i play-off furono spostati all'8 gennaio.
Venne stabilito che lo sgambetto (clipping) fosse illegale anche attorno alla linea di scrimmage così come lo era nel resto del campo.
Venne istituito un nuovo sistema di instant replay (diverso da quello precedentemente in vigore dal 1986 al 1991) ispirato a quello già usato nella USFL nel 1985 con le seguenti caratteristiche:
In ogni partita ogni squadra ha a disposizione due richieste di revisione di una decisione arbitrale (in inglese: challange). Ogni richiesta comporta l'uso di un time out da parte della squadra richiedente. Se la richiesta ha esito positivo e ottiene la revisione della decisione arbitrale, il time out non viene assegnato.
Negli ultimi due minuti del secondo e del quarto quarto di gioco e durante tutti i tempi supplementari le revisioni potranno essere richieste da un arbitro chiamato Replay Assistant. Tale arbitro ha facoltà di richiedere un numero illimitato di revisioni indipendentemente dal numero di time out rimasti a disposizione delle squadre e le sue richieste non comportano l'assegnazione di nessun time out.
Tutti i replay saranno riportati all'arbitro principale su un monitor a livello del campo. La decisione presa sul campo sarà rovesciata solo se risulterà evidente dal replay. L'arbitro ha 90 secondi a disposizione per rivedere l'azione.
Gli arbitri verranno avvertiti della richiesta di revisione tramite un dispositivo elettronico a vibrazione. Ogni capo allenatore ha inoltre a disposizione un fazzoletto rosso (red flag) con cui segnalare la richiesta.
Il sistema di replay può essere usato solo per decidere le seguenti situazioni:
realizzazione o meno di punti
passaggio incompleto, completato o intercettato
recupero di palla persa dentro o fuori dal campo
tocco di un passaggio da parte di ricevitori ineleggibili o difensori
I play-off iniziarono con il Wild Card Weekend l'8 e 9 gennaio 2000. I Divisional Playoff si giocarono il 15 e 16 gennaio e i Conference Championship Game il 23 gennaio. Il Super Bowl XXXIV si giocò il 30 gennaio al Georgia Dome di Atlanta.
^Miami ottenne il seed 6 su Kansas City in base ai migliori risultati contro gli avversari comuni (6-1 contro 5-3 dei Chiefs).
^I Jets finirono davanti a New England in base al migliore risultato nella Division (4-4 contro 2-6 dei Patriots).
^Dallas ottenne il seed 5 su Detroit in base ai migliori risultati contro gli avversari comuni (3-2 contro 3-3 dei Lions) e su Carolina in base ai migliori risultati di Conference (7-5 contro 6-6 dei Panthers).
^Detroit ottenne il seed 6 su Green Bay e Carolina in base ai migliori risultati di Conference (7-5 contro 6-6 dei Packers e 6-6 dei Panthers).
^Seattle finì davanti a Kansas City in base ai migliori risultati negli scontri diretti (2-0).
^San Diego finì davanti a Oakland in base al miglior risultato nella Division (5-3 contro 3-5 dei Raiders).